本发明提供了一种基于测定油样品中羟基价来鉴别地沟油的检测方法。该方法以乙酰化反应为基础，通过羟基乙酰化后生成乙酸的量来间接表征羟基含量。该方法包括：油样品乙酰化定量测定和油样品的酸价测定，利用乙酰化和酸价实验结果计算羟基价。该方法具有操作简单、成本低廉的特点；同时，该方法检测地沟油基于地沟油在精炼过程中不易被除去的物质—甘油二酯，因此该检测方法的特异性强，结果可靠。
1.一种基于检测羟基价鉴别地沟油的方法，包括如下步骤：xa0(1)称取质量为m₁的待鉴别的油样品；xa0(2)向步骤(1)中所述油样品中加入吡啶与乙酸酐的混合溶液，并混合均匀；xa0(3)将步骤(2)得到的混合溶液进行加热回流；所述加热回流后还包括加入10mL蒸馏水继续加热回流10min的步骤；(4)向步骤(3)得到的混合溶液中加入正丁醇，然后加入酚酞指示剂，并用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至出现淡红色终点，记下滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₂；xa0(5)做不加所述油样品的空白实验，重复上述步骤(2)～(4)，记下空白实验滴定至终点时所消耗的所述氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₀；xa0(6)称取质量为m₂的待鉴别的油样品；xa0(7)向步骤(6)中所述油样品中加入用所述氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至中性的吡啶，摇匀并溶解该油样品；xa0(8)向步骤(7)得到的混合溶液中加入所述酚酞指示剂，并用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至出现淡红色终点，记下滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₁；利用如下公式(1)计算待检测油样品的羟基价：xa0ntent="drawing" img-format="jpg" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>如果计算得到的羟基价的值大于8mgxa0KOH·g^-1，则油样品中含有地沟油。xa0
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述m₁为4～5g，所述m₂为9～11g。xa0
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述吡啶与乙酸酐的混合溶液中，吡啶与乙酸酐的体积份数比为3：1；所述吡啶与乙酸酐的混合溶液的加入量为5mL。xa0
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述加热回流的时间为1h，温度为80℃。xa0
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述正丁醇的加入量为25mL；xa0所述酚酞指示剂为由1.0g酚酞溶于100mL的95％乙醇中得到；xa0所述氢氧化钾-乙醇标准溶液的浓度为0.5mol·L^-1。xa0
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤(7)中，所述吡啶的加入量为10mL。xa0
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(4)和(8)中，所述酚酞指示剂的加入量为2～3滴。xa0技术领域
本发明涉及一种基于检测羟基价鉴别地沟油的方法，属于食品检测领域。
背景技术
地沟油，泛指在生活中存在的各类劣质油，主要有以下三种来源：狭义上的从地沟里回收的油、经过多次煎炸的煎炸老油和劣质动物油脂。如果地沟油经妥善处理，可制作肥皂、生物柴油等产品，以达到变废为宝的目的。但是有些非法厂商为了赚取地沟油回流餐桌这一途径的巨大利润，非法回收精炼地沟油。由于地沟油中含有黄曲霉毒素、多环芳烃等强致癌物质，如果人们长期食用地沟油可能会引发癌症等各种疾病，对人体的危害极大，因此地沟油带来的社会成本极高。自从国内出现地沟油回流餐桌的事件以来，社会各界都积极关注并设法解决地沟油问题。国务院及时发布治理地沟油的文件《加强地沟油整治和餐厨废弃物管理的意见》。但是非法厂商依然钻着严厉打击的缝隙，生产着地沟油，危害社会。卫生部也曾两次公开向全社会征集地沟油检测的方法，想从检测的途径杜绝餐馆使用地沟油，但是地沟油尚缺乏一种简单准确的检测方法，因此寻找到一种合适的检测方法具有重大的社会意义。全社会积极响应卫生部征集地沟油的号召，社会各界共提交了上百种检测方法，其中主要有如下几种检测方法：①测电导率法：由于经过使用的地沟油经过食用调料（食盐）和下水道的严重污染，其中常常含有大量金属离子，这些物质的存在导致地沟油的电导率明显高于正常食用油，电导率法以测定油样品的导电能力为依据，从而判别地沟油。该方法主要存在如下技术缺陷：地沟油经过深度精炼这些导电性的物质能够被基本除去，这样深度精炼的地沟油电导率可能会与正常食用油相近，导致无法进行判断。②胆固醇含量判别法：由于地沟油大多是不同来源的废弃食用油脂混合，因此地沟油中常含有动物油脂。动物油脂相对于植物油含有较高的胆固醇，胆固醇含量判别法检测油样品中的胆固醇含量，从而判别地沟油。该种方法的主要技术缺陷在于：并不是所有的地沟油中都含有动物油脂成分，比如煎炸老油中就含极少量的胆固醇；此外，目前国内检测油脂中胆固醇含量的主要方法是利用气相色谱法，该方法的灵敏度较低。因此该方法的特异性不强，容易造成误判。③特定基因组成：由于大多数地沟油中会含有动物油脂，根据分子生物学基因鉴定方法，鉴定油脂中的动物基因，来判定食用油中是否含有动物源性成分。该方法的主要技术缺陷与胆固醇含量判别法一样：并不是所有的地沟油中都含有动物油脂成分。因此该方法的特异性不强。④多环芳烃法：食用油在烹饪时经历高温，会生成多环芳烃，通过检测多环芳烃的含量可以判断油样品是否为地沟油。该方法的主要技术缺陷在于地沟油白土脱色脱臭过程中，白土疏松多孔的结构能够吸附掉大部分多环芳烃，导致多环芳烃的含量不一定超标。而且只有油经过深度的煎炸，才会有较多的多环芳烃，大多数地沟油只是经过一次使用，其中的多环芳烃含量不一定很高。因此，利用多环芳烃进行检测容易造成误判。⑤测表面活性剂残留量法：由于地沟油是经过使用的油，常常会被水池和下水道污染，而这些地方常会有洗涤剂，而洗涤剂中含有表面活性剂，而最常用的表面活性剂—十二烷基苯磺酸钠具有荧光效应，据此可以用来检测油中是否含有表面活性剂来判断是否为地沟油。该方法的主要技术缺陷在于：地沟油深度精炼之后，表面活性剂在蒸馏脱酸过程中被除去，因此该方法的特异性不强。综上，这些现存方法都存在一个问题：检测地沟油特异性不强，不能准确区别地沟油与正常食用油。地沟油检测的主要难点在于地沟油来源广泛，含有杂质各不相同，如图1所示，此外，各个非法厂商进行地沟油处理时的精炼程度各不相同，因此并没有具有一个广泛代表性的地沟油样品。这就导致在设计地沟油检测方法时不能仅仅抓住部分地沟油的特殊性，而应该从地沟油的共有成分出发，抓住在精炼过程中不容易被除去的成分来设计检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于检测羟基价鉴别地沟油的方法，本发明通过检测一种特异性较强的检测指标，能够准确地区分地沟油与正常食用油，从而确保食用油的公共卫生。本发明所提供的一种基于检测羟基价鉴别地沟油的方法，包括如下步骤：（1）称取质量为m₁的待鉴别的油样品；（2）向步骤（1）中所述油样品中加入吡啶与乙酸酐的混合溶液，并混合均匀；（3）将步骤（2）得到的混合溶液进行加热回流；（4）向步骤（3）得到的混合溶液中加入正丁醇，然后加入酚酞指示剂，并用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至出现淡红色终点，记下滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₂；（5）做不加所述油样品的空白实验，重复上述步骤（2）~（4），记下空白实验滴定至终点时所消耗的所述氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₀；（6）称取质量为m₂的待鉴别的油样品；（7）向步骤（6）中所述油样品中加入用所述氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至中性的吡啶，摇匀并溶解该油样品；（8）向步骤（7）得到的混合溶液中加入所述酚酞指示剂，并用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至出现淡红色终点，记下滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₁；利用如下公式（1）计算待检测油样品的羟基价：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>如果计算得到的羟基价的值大于8mg(KOH)·g^-1，则油样品中含有地沟油。上述的方法中，所述m₁可为4~5g，所述m₂可为9~11g。上述的方法中，步骤（2）中，所述吡啶与乙酸可酐的混合溶液中，吡啶与乙酸酐的体积份数比可为3：1；所述吡啶与乙酸酐的混合溶液的加入量可为5mL。上述的方法中，步骤（3）中，所述加热回流的时间可为1h，温度可为80℃；所述加热回流后还包括加入10mL蒸馏水继续在80℃下加热回流10min的步骤。上述的方法中，步骤（4）中，所述正丁醇的加入量可为25mL；所述酚酞指示剂为由1.0g酚酞溶于100mL的95%乙醇中得到；所述氢氧化钾-乙醇标准溶液的浓度可为0.5mol·L^-1。上述的方法中，步骤（7）中，所述吡啶的加入量可为10mL。上述的方法中，步骤（4）和（8）中，所述酚酞指示剂的加入量可为2~3滴，约0.1ml。本发明提供的鉴别地沟油的方法基于地沟油精炼过程中难以除去的物质—甘油二酯，利用乙酰化反应测定油样品中的羟基价，具有操作简单、成本低廉、判别准确等优点。
附图说明
图1为非法厂商精炼地沟油的步骤及其过程中地沟油里杂质的变化情况。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本实施例所用的油样品如下：1）大豆油：福临门一级大豆油，生产日期：2011.12.19；2）花生油：福临门压榨一级花生油，生产日期：2011.12.12；3）食堂经煎炸大豆油：从清华大学丁香园食堂获得；4）未经处理的地沟油：江苏洁美生物能源有限公司提供，用来制备生物柴油的未经处理的地沟油原油；5）脱色脱臭的地沟油：自行利用白土对油样品4）进行脱色脱臭而得到；6）精制地沟油：江苏某饭店提供。对上述6种油样品进行检测实验，每个样品的检测步骤如下：1）利用差重法用100mL磨口锥形瓶称取4~5g的油样品，称准至0.0001g，记为m₁；2）在步骤1）中的100mL磨口锥形瓶中用5mL移液枪准确加入5mL吡啶-乙酸酐混合溶液，其中吡啶与乙酸酐的体积比为3：1，轻轻摇动混合均匀；3）将步骤2）中的100mL磨口锥形瓶至于水浴槽中，接上球形冷凝回流管，设置水浴槽的温度为80℃，加热回流1h；4）在步骤3）加热回流1h结束后，从冷凝管上端缓缓地加入10mL蒸馏水，并继续加热回流10min；5）在步骤4）结束之后，从水浴槽中取出磨口锥形瓶和球形冷凝回流管，冷却至室温；6）利用25mL量筒量取25mL正丁醇，将一半的正丁醇从球形冷凝管上端加入，然后移去球形冷凝管，用剩下的正丁醇清洗磨口锥形瓶的壁面；7）在步骤6）中的100mL锥形瓶中加入2滴酚酞指示剂，其中该酚酞指示剂为由1.0g酚酞溶于100mL的95%乙醇中得到；利用配制好的氢氧化钾-乙醇标准溶液（浓度为0.5mol·L^-1）滴定至出现淡红色终点，记下滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₂；8）同时做不加油样品的空白试验，重复上述步骤1）到步骤7），记下空白实验滴定至终点时所消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₀；9）用250mL锥形瓶称取9～11g油样品，称准至0.0001g，记为m₂；10）在步骤9）中的250mL锥形瓶中加入10mL用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至中性吡啶，摇匀溶解油样品；11）在步骤10）中的250mL锥形瓶中加入2滴酚酞指示剂，并用氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至出现淡红色终点，记下消耗的氢氧化钾-乙醇标准溶液的体积V₁。由上述步骤可以得到6种样品油的酸价和羟基价：表1样品的酸价和羟基价检测结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>从检测结果可以发现，大豆油的羟基价为5.23mg(KOH)·g^-1，花生油的羟基价为4.43mg(KOH)·g^-1均小于8mg(KOH)·g^-1，因此判断二者为正常食用油；而经煎炸大豆油、未处理地沟油、脱色脱臭地沟油和精制地沟油的酸价均高于8mg(KOH)·g^-1，可以判断这些油中含有地沟油或者已经经过使用的油。